作业帮分离与鉴定蛋白质已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/27 13:25:16
分离与鉴定蛋白质已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8
分离与鉴定蛋白质
已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8.3,如何分离和鉴别该植物叶绿体蛋白A?
分离与鉴定蛋白质已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8
1.破碎细胞（简单 自己查资料）
2.提取纯化叶绿体（简单 自己查资料）
3.用pH 8.25 缓冲液 破碎叶绿体
4.离心去除沉淀（沉淀含有蛋白B）收集上清液（含有蛋白A）
5.缓慢调解上清液pH 到6.8-6.9,离心 收集沉淀（含有蛋白A）
6.用pH 到6.8-6.9的缓冲液洗涤沉淀.离心收集沉淀.
7.最后溶解于pH 7.6-7.8 的 比如pBS 中
8.鉴定 SDS-PAGE （加2mer 等还原剂）,电泳 观察条带数目和分子量
大小一样，跑电泳肯定是不行了！不知道还有没有其他的区别？
蛋白质、多肽均属于两性电解质，在缓冲液pH小于其等电点时，带净正电荷，而在缓冲液pH大于其等电点时，带净负电荷。阳离子交换凝胶本身带负电荷基团。由于静电相互作用而使样品结合到凝胶上，再更换缓冲液的pH值进行洗脱
就目前给出的条件，采用阳离子交换色谱，酸性条件下挂柱。
更换缓冲液的pH(本实验设置在7-8之间）值进行洗...
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大小一样，跑电泳肯定是不行了！不知道还有没有其他的区别？
蛋白质、多肽均属于两性电解质，在缓冲液pH小于其等电点时，带净正电荷，而在缓冲液pH大于其等电点时，带净负电荷。阳离子交换凝胶本身带负电荷基团。由于静电相互作用而使样品结合到凝胶上，再更换缓冲液的pH值进行洗脱
就目前给出的条件，采用阳离子交换色谱，酸性条件下挂柱。
更换缓冲液的pH(本实验设置在7-8之间）值进行洗脱。
收起
进行双向电泳分析