怎样确定pcr反应温度有引物了,怎样跟引物设置一个好的反应体系温度,有没有计算公式,知道的说下,

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/29 01:44:17
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怎样确定pcr反应温度
有引物了,怎样跟引物设置一个好的反应体系温度,有没有计算公式,知道的说下,

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要是用引物设计软件比如Primer设计的引物,软件会直接显示Tm值;如果不是的话,可以按下面这个公式计算:
大于10bp,Tm=81.5+41[GC%]-[675/引物长度]
小于10bp,Tm=[(GC%*总碱基数)*4]+{[(1.00-GC%)*引物长度]*2}
变性温度一般是94度,延伸温度72度

有一个经验公式,和引物的C+G个数相关,好像是4*(G+C)-?,?值记不清了。

怎样确定pcr反应温度有引物了,怎样跟引物设置一个好的反应体系温度,有没有计算公式,知道的说下, PCR的引物怎样设计, PCR的引物怎样选取? PCR反应的引物有何种要求? 单引物PCR对照的原理为什么有时候做PCR要做单引物扩增对照?和阴性对照的差异是什么?有什么意义?单引物扩增有条带和没条带分别说明啥?应该要怎样才是对的?我做了一次PCR..单引物双引物和 怎样确定反应体系的温度 pcr加入引物浓度过高 10倍 会怎样 pcr如果只有引物二聚体时应该怎样调整 PCR 怎样稀释做50微升体系的PCR使用的引物浓度是多少?怎样稀释? 请问PCR反应最初的退火温度应该怎样设定?是应该比引物设计公司的提供的tm高呢,还是低呢,应该相差多少呢? 在引物设计时,长度超过25bp时,其PCR退火温度怎么确定? 如果从primer5中得到引物的tm 值怎么确定pcr温度 pcr引物浓度如果PCR反应体系的中,引物加多了,会有什么样的结果呢?那如果我加多了,是不是就是很可能总是出现引物二聚体啊,我总是这样的结果 PCR复性温度如何确定为什么要在最后延伸10min?是否有非特异性扩增产物(或引物二聚体),如何消除? 反向PCR引物设计的原理?怎样设计反向pcr的引物?急我是想知道具体的原理和方法,最好有个例子!还有我有个反向PCR 的引物,就是 在原来的序列上找不到引物的序列?为什么? .PCR反应中,循环温度范围对引物DNA双螺旋稳定性的影响及PCR产物的影响?越快越好, 两种引物怎样确定DNA长度为什么说引物确定延伸出的DNA长度?怎样确定的 如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间