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来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/29 09:55:33

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DNA序列分析!
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以上为一段DNA序列,其上游下游序列未知,
1 请分析以上序列含有哪些单酶切位点的限制性内切酶
2 设计反向PCR扩增其上游下游序列未知序列的详细实验方案（包括选用什么酶酶切,设计具体引物）

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1 常见单一限制性酶切位点：
Hind III 495；Nde I 453；
2.1〉提取基因组DNA；
2.2〉用实验室常用的而序列上没有酶切位点的几种酶分别酶切基因组DNA,如EcoR I/BamH I/Sac I/Xho I完全酶解,得到四组片断；
2.3〉回收纯化这几组片断
2.4〉让片断自连,得到四个自连的文库；
2.5〉用片断上特有的酶Nde I（Nde I或Hind III,感觉Nde I对引物选择余地稍大）分别去切文库,使DNA线形化；
2.6〉纯化线形DNA；
2.7〉以纯化线形DNA为模板,分别用梅切位点两端的引物（1F：5' TTGAAGGCGTCCACTGATACTC 3'；1R：5' TGGAGGTCTCCCGACGTGGCT 3',可以多选几对,用巢氏引物效果更好）去扩增
2.8〉回收特意条带,测序.

1 用DNAstar 的mapdraw或者seqbuilder
2 用race，或者tail-pcr，具体自己看
没人给你那么详细的解释，百度知道是提高用的

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