蛋白质定量测量方法除双缩脲法外,还有哪些测定方法?

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/04 11:12:07

蛋白质定量测量方法除双缩脲法外,还有哪些测定方法?
蛋白质定量测量方法除双缩脲法外,还有哪些测定方法?

蛋白质定量测量方法除双缩脲法外,还有哪些测定方法?
蛋白质的定量定主要有直接紫外吸收法、Bradford法和Lorry法三种.
蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,所以任何一个蛋白质都具有280nm附近的紫外吸收峰,在此波长范围内,蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系.
改良的Bradford法,蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合,在一定的线性范围内,反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量.
Lorry法.蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展,从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应,产生蓝色,在一定浓度范围内,其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比,由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同,因此在测定时需使用同种蛋白质作标准.
中国药典推荐的方法是Lorry法.蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展,从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应,产生蓝色,在一定浓度范围内,其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比,由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同,因此在测定时需使用同种蛋白质作标准.
美国fda药典推荐的是Bradford法,蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合,在一定的线性范围内,反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量.
两者大多数情况下是都能给较为精确的对蛋白质定量.

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