我做逆转录时选用随机引物,那么做cDNA扩增时的特异性引物怎么获取呢?

我做逆转录时选用随机引物,那么做cDNA扩增时的特异性引物怎么获取呢? primer5.0引物设计所用序列为什么是mRNA?做qRT-PCR时设计引物是直接将NCBI的mRNA区域中CDS区序列拷贝到primer5.0里面,可是做qRT-PCR前不是有一步是将RNA逆转录成cDNA吗?那以mRNA设计引物不是反了吗?我 如何检测cDNA我做RT-PCR想在PCR之前检测下我的cDNA看下逆转录有没有问题,请问高手如何检测,跑电泳可以吗,那么电泳条带应该是怎么样算是比较好的? 下一步要做real time pcr,逆转录引物怎么选择,随机引物和oligo dT引物选哪个比较好real time pcr检测几个基因的表达量,现在提取rna后做逆转录,买的takara的逆转录试剂盒,不知道应该选随机引物还是o 逆转录 时是否需要引物,oligodt扩增出来的是什么样序列的cDNA cDNA克隆,为什么没有文献用tttttttt作引物,而要在其他位置另找引物?如题,逆转录后为什么不继续用ttttttttttt做cDNA的PCR扩增的那一对引物之一?这样不是更简单吗 RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?我做反转录的操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水,65C反应10min,冰上放置5min后,再加dNTP,RNaseA,BUFFER,MTV逆转录酶,反应25℃10min,37℃60min,70℃10min.我想 PCR实验中加cDNA模板量是否要一致?我的3个样本在逆转录成cDNA后测浓度发现，样本1浓度是599ng/ul，样本2为1000左右，样本3为1290，1.在做PCR时，加入的cDNA体积是不是应该根据浓度调整为，样本1 做克隆时,请问在引物前加的一段保护碱基和内切酶序列需要和cDNA互补吗? 提取RNA之后做体外逆转录cDNA,得到的是所有mRNA的cDNA吗?为什么?得到的是所有提取的mRNA的cDNA吗？ 用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同是用这两个模板做pcr，在设计引物时，设计引物所用的序列有区别么 DDRT-PCR的随机引物是怎么设计的?没做过,不太懂这个,文献都只说随机引物,没说这个随机引物是怎么生成的?看的很困惑你这说的是锚定引物啊，不是随机引物呢，我晕了，那什么是锚定引物呢 针对mRNA上的某个基因设计逆转录PCR的引物,逆转录时得到的cDNA只是这个基因的cDNA吗?如果不是,那还会包括它下游的所有基因的cDNA,还是包括它所在的操纵子的其他基因的cDNA? 要做组织提取RNA 逆转录为cDNA 进行实时PCR 请问实验组和对照组的组织要取等量的吗?我个人理解是在做你转录这一步时 控制RNA的取量一致 开始时的组织量不一定要相同 而且我要做的是肠系 pcr,cDNA引物的问题用真核细胞mRNA反转录出来的cDNA来做引物进行pcr扩增,模板DNA是什么呢?如果是真核细胞中提取的DNA,那不也是有内含子的么?那我怎么来得到目的基因呢?第一个的意思是，在做m RNA的反转录产物应该有几条带,我用olig dt和随机引物做的反转录 我现在有96份植物材料,要从100个随机引物中筛选出合适的引物,那请问实验操作时,每个引物对96份标本材料都进行pcr电泳,那是不是就要做96*100=9600个实验,是这样进行筛选引物的么?求具体的讲 2OD的引物怎么稀释?我要做RAPD,选的随机引物都是每条10个碱基的.上海生工的引物合成报告单上显示2OD/管,请问该怎么加灭菌水?