作业帮求救!pcr产物没有条带...前8个孔是我两个样品4个梯度的pcr产物,marker,质粒(阳性对照),空白对照觉得这次的marker还有质粒都有拖尾的现象,质粒可能是浓度太大了,没有稀释,可是marker也这样,这次
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/29 00:40:54
求救!pcr产物没有条带...前8个孔是我两个样品4个梯度的pcr产物,marker,质粒(阳性对照),空白对照觉得这次的marker还有质粒都有拖尾的现象,质粒可能是浓度太大了,没有稀释,可是marker也这样,这次
求救!pcr产物没有条带...
前8个孔是我两个样品4个梯度的pcr产物,marker,质粒(阳性对照),空白对照
觉得这次的marker还有质粒都有拖尾的现象,质粒可能是浓度太大了,没有稀释,可是marker也这样,这次制胶很小心了,缓冲液也是新的.
问题最大是pcr产物竟然一个都没有出来,我把模板也跑了一次,是有条带的,没有完全降解掉.虽然模板没有很纯,但是以前也是可以P出来了,还有,如果PCR真没P出来,为什么没有出现引物二聚体啊?求救!
目的片段为750左右,跟质粒一样
求救!pcr产物没有条带...前8个孔是我两个样品4个梯度的pcr产物,marker,质粒(阳性对照),空白对照觉得这次的marker还有质粒都有拖尾的现象,质粒可能是浓度太大了,没有稀释,可是marker也这样,这次
首先要确定引物是否降解了,pcr常用的引物都是10p浓度的,如果四度放久了会降解,既然以前能做出来,那么很可能是引物降解了,而且你的阳性对照是有条带的说明PCR的体系和条件是没问题的,所以推测引物出问题了,重新稀释一些引物再试试吧,PCR条件也可以变变,做个touchdown试试,
我的知识范围还远不及此....
p不出来跟你做胶、拖尾不拖尾有鸟的关系？p不出来就一定有引物二聚体？扯淡
首先你保证自己的操作是没有问题的，看看你自己以往操作的结果好不好就能知道，如果同样的条件下你一直都是有时候能P出来有时候不行，那就是你的技术问题。
其次检查PCR试剂，是不是有的试剂时间长或者污染了，变质了，失效了。特别是Taq和dNTP这两样，最容易出问题。
PCR仪器也检查下，程序是否正常，样品台...
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p不出来跟你做胶、拖尾不拖尾有鸟的关系？p不出来就一定有引物二聚体？扯淡
首先你保证自己的操作是没有问题的，看看你自己以往操作的结果好不好就能知道，如果同样的条件下你一直都是有时候能P出来有时候不行，那就是你的技术问题。
其次检查PCR试剂，是不是有的试剂时间长或者污染了，变质了，失效了。特别是Taq和dNTP这两样，最容易出问题。
PCR仪器也检查下，程序是否正常，样品台的温度控制是否准确，是否存在温度梯度。
另外，做实验不要那么死板，胶的浓度随便做，你不就跑个胶看条带么？又不是跑胶分离。还加marker，虽然marker不贵，但是你这里加marker有什么用？你都有了阳性对照了，本身就是一个分子量的标记了，你还加marker不是画蛇添足？
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你的目的片段多大啊，拖带会不会是电压太高的原因